FRET/蛍光タンパク質アッセイ用の新しい構成のZE5 Cell Analyzer
- FRET/蛍光タンパク質アッセイに最適
- 3レーザー（V:405/ B:488 /YG:561 nm)、20蛍光検出(V:7 / B:6 /YG:7)
- 微小検出器あり、なし両方をラインナップ
- 蛍光タンパク質、FRET,海洋生物学のアッセイに最適
- ZE5シリーズ共通の特長：オールインワンのサンプルローダー（深底プレート対応）、最大100,000イベント/秒の測定速度、ハイスループットモード、優れた感度と安定性、APIによる外部機器との接続性
ZE5 Cell Analyzer Violet – Blue – Yellow-Green (V/B/YG)構成と試薬ガイド
*ZE5 Cell Analyzerで使用できる蛍光物質と蛍光タンパク質の一例です。
| フィルター | 蛍光物質 |
|---|---|
| 420/10 | BV421 |
| 460/22 | SBV440, Pacific Blue, mTurquoise |
| 525/50 | SBV515, BV510, AmCyan, CFP, Cascade Yellow |
| 615/24 | SBV610, BV605 |
| 670/30 | SBV670, BV650 |
| 720/60 | BV711 |
| 750LP | BV786 |
| フィルター | 蛍光物質 |
|---|---|
| 488/10 | SSC |
| 509/24 | FITC, BB515, eGFP, mClover |
| 549/15 | eYFP |
| 583/30 | PE |
| 615/24 | PE-Texas Red |
| 692/80 | SBB700, PerCp-Cy5.5, BB700, PE-Cy5 |
| 750LP | PE-AF750, PE-Cy7 |
| フィルター | 蛍光物質 |
|---|---|
| 577/15 | PE |
| 589/15 | dsRed, tdTomato, RFP |
| 615/24 | PE-Dazzle, PE-CF594, mCherry |
| 640/20 | mPlum |
| 670/30 | PE-Cy5, PE-AF647 |
| 720/60 | PE-Cy5.5 |
| 750LP | PE-Cy7, PE-AF750 |
FRET
FRET（Förster共鳴エネルギー移動）は、生細胞におけるタンパク質相互作用とタンパク質集合を分析するために広く使用されています。 この手法は、励起されたドナー蛍光物質からアクセプター蛍光物質へのエネルギーの移動に基づいています。ただし、1）ドナーとアクセプターが近接している（<10 nm）、2）ドナーの発光スペクトルがアクセプターの励起と重なっている場合 。 従来、FRETアッセイは蛍光顕微鏡法によって行われていましたが、これは技術的に困難で、非定量的であり、ハイスループットまたは多数の細胞での分析は困難でした。
近年、フローサイトメトリーは、これらの制限を克服する高速およびハイスループット機能により、FRETアッセイにより適した技術として確立されています。 FRET技術とFRETペアの継続的な進歩により、フローサイトメトリーベースのFRETアプリケーションは、特にがん研究とハイスループットスクリーニングの分野でさらに拡大しています。
「イメージングフローサイトメーターを使用すると、ウェルあたり約20,000個のゲートセルを備えた96ウェルプレートを分析するのに8時間かかります。 ただし、DAmFRETは、一般的な（非イメージング）サイトメーター（ZE5 Cell Analyzer）を使用して定期的に実行し、はるかに高いスループット（1分あたり最大20サンプル）を実現しています。」
ハイスループットDAmFRETアッセイを使用して、ヒトインフラマソームタンパク質の自己組織化を評価する方法、およびZE5 CellAnalyzerがスクリーニングスループットを次のレベルに引き上げた方法をご覧ください。
論文を参照
ZE5 Cell AnalyzerでのFRETアッセイ論文をご参照ください
一般的に利用されるFRETペアと蛍光タンパク質
アッセイを始めるのに役立つ、ZE5 Cell AnalyzerのVBYGモデルで使用できる一般的に使用されるFRETペアと蛍光タンパク質をいくつかご紹介します。
| ドナー/アクセプター | ZE5 励起 レーザー | ZE5 FRET検出器 |
|---|---|---|
| eCFP/eYFP | 405 nm | 405 nm-525/50 |
| mTurquoise-mCitrine | 405 nm | 405 nm-525/50 |
| mTurquoise-mVenus | 405 nm | 405 nm-525/50 |
| mAmetrine-tdTomato | 405 nm | 405 nm-615/24 |
| mClover-mRuby | 488 nm | 488 nm-583/30 |
| eGFP-mCherry | 488 nm | 488 nm-615/24 |
| CyOFP1-mCardinal | 488 nm | 488 nm-692/80 |
Bajar BT et al. (2016). A guide to fluorescent protein FRET pairs. Sensors (Basel). Publications16(9):1488.
| 405 nm (V) | 488 nm (B) | 561 nm (Y) |
|---|---|---|
| eCFP | eGFP | dsRed, tdTomato, RFP |
| mTurquoise | eYFP | mRuby |
| mCerulean | Venus | mCherry |
| Sapphire | mClover | mOrange |
| mPlum | ||
| mRaspberry | ||
| mStrawberry |
Bajar BTet al. (2016). A guide to fluorescent protein FRET pairs. Sensors (Basel). publications16(9):1488.
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