StarBright UltraViolet Dyes

SBUV400 Dye は、明るい 355 nm レーザー励起色素であり、StarBright Dyes のすべての利点を備えており、従来型/スペクトル式問わずあらゆるフローサイトメトメーターでの使用に適しています (図 2)。

図2. 明るさの比較。ヒト末梢血をCD4SBUV400（MCA1267SBUV400）またはCD4BUV395で染色した。SBUV400は競合色素に比べ2倍の明るさである。（略語）BUV:Brilliant Ultraviolet; SBUV:StarBright UltraViolet; SI:staining index.

他のチャンネルへの励起や蛍光の漏れ込みを最小限に抑え、特別なバッファーを必要としないため、SBUV400は既存のパネルに簡単に追加してパネルサイズを拡大したり、他のチャンネルにスピルオーバーする蛍光色素を置き換えたりすることが可能です。StarBright Dyes を含む他の蛍光色素を用いた SBUV400 の染色例を 図3. に示します。

図3. SBUV色素の性能。ヒト末梢血を様々なSBUV400標識抗体で染色し、異なるStarBright VioletまたはPE標識抗体で対比染色を行った。染色は、1% BSAを含むPBS中で行った。

SBUV445 Dye は、波長の近い競合色素の最大20倍の輝度を持ち（図4）、励起および蛍光スペクトルが類似した競合色素を使用した場合には、抗原密度が高くても、時に困難な陽性集団と陰性集団を明確に分離することが可能です。

図4. 明るさの比較。 ヒト末梢血をCDSBUV445（MCA1267SBUV445）またはCD4 DyLight 350で染色した。 SBUV445は競合色素の20倍以上の明るさである。（略語）SBUV:StarBright UltraViolet、 SI:stain index.

SBUV445 は、マウス末梢血 NK 細胞、CD25 などの活性化時にアップレギュレートされたマーカー、CD27 などの一般的な免疫表現型マーカーなどの希少集団を検出するのに十分な明るさです (図 5)。 染色時に特別な緩衝液を必要とせずに固定可能で、ロット間の再現性が高くなっています。 SBUV445 は既存のパネルに簡単に追加でき、解像度を高めるために暗い色素を置き換えることができます。 355 nm UV レーザーからこの波長で発光する適切な色素は他にないため、この色素を使用すると、すべてのレーザーとフィルターでマーカーを分離して、ベスト プラクティスに従うことができます。 さらに、スペクトル フローサイトメトリーでは、競合する色素がないため、SBUV445 の類似性スコアは低く、全体的な複雑さを増すことなくパネル サイズを大きくすることができます。

図5. SBUV445の性能。ヒト末梢血を各種SBUV445標識抗体で染色し、各種StarBright Violet Dyes, StarBright Blue Dyes, またはFITC標識抗体で対比染色した。染色は1%BSAを含むPBSにFc blockを加えて行った。

SBUV510は、StarBright Dyesのすべての利点を備えた355nmレーザー励起の明るい色素で、従来のフローサイトメトリーおよびスペクトルフローサイトメトリーのいづれの使用にも適しています（図6）。

図6. 明るさの比較。ヒト末梢血をCDSBUV510（MCA1267SBUV510）またはCD4 BUV496で染色した。SBUV510は競合色素に比べ2倍の明るさである。（略語）BUV:Brilliant Ultraviolet、SBUV:StarBright UltraViolet、SI:stain index。

SBUV510は、最も近い競合色素の2倍の輝度を持ち（図6）、従来のタンデム色素とは異なるものである。そのため、ドナー色素から漏れ出るシグナルが減少しています。固定化可能で、特別なバッファーを必要とせず、タンデム色素と比較してロット間の再現性が高いため、SBUV510は既存のパネルに簡単に追加でき、より高分解能の色素の置き換えが可能です。

SBUV575 は、StarBright Dyes のすべての利点を備えた 355 nm レーザー励起の高輝度色素で、従来のフローサイトメトリーおよびスペクトルフローサイトメーターでの使用に適しています（図 7A）。競合色素の2倍の輝度を持ち、CD4およびCD8 T細胞上のCD28のような、細胞表面にあまり存在しない抗原の検出にも、特別なバッファーを使用せずに使用することができます。(図7B)

図7. 低密度マーカー用の高輝度色素。A, ヒト末梢血をCD4SBUV575（MCA1267SBUV575）またはCD4BUV563で染色した。SBUV665は競合色素の2倍の明るさである。（略語）BUV:Brilliant Ultraviolet、SBUV:StarBright UltraViolet、SI:stain index。 B, ヒト末梢血をCD4SBUV510 (MCA1267SBUV510), CD8SBV710 (MCA1226SBV710), CD27SBV670 (MCA755SBV670) および CD28SBUV575 (MCA709SBUV575) で染色したものです。

SBUV605 は、StarBright Dyes のすべての利点を備えた 355 nm レーザー励起の明るい色素で、従来のフローサイトメトリーおよびスペクトルフローサイトメーターでの使用に適しています（図 8）。最も近い競合色素よりも明るく、スペクトル特性も改善されているため、マルチカラーパネルにおける既存色素の代替品として最適です。

図8. SBUV605の性能。A,ヒト末梢血をCD4SBUV605（MCA1267SBUV605）またはCD4 BUV615で染色したものです。SBUV510は競合色素より明るい（略語）BUV:Brilliant Ultraviolet、SBUV:StarBright UltraViolet、SI:stain index。 B,ヒト末梢血をCD3SBUV400 (MCA463SBUV400) とCD19SBUV605 (MCA1940SBUV605) で染色しました。

SBUV665 Dyeは、StarBright Dyesのすべての利点を備えた355nm レーザー励起の明るい色素で、特別なバッファーを必要とせず、従来のフローサイトメトリーおよびフルスペクトラムのフローサイトメトリーでの使用に適しています（図9）。

図9.明るさの比較。　ヒト末梢血をCD4SBUV665（MCA1267SBUV665）またはCD4BUV395で染色した。SBUV665は競合色素に比べ2倍の明るさである。（略語）BUV:Brilliant Ultraviolet、SBUV:StarBright UltraViolet、SI:stain index。

SBUV665はBUV661と比較してAlexa647やAlexa700へのスピルオーバーが減少していますが、それでも弱陽性集団の分離が問題になる場合があります。パネル構築のベストプラクティスに従い、問題を引き起こす可能性のある色素を使用したマーカーの組み合わせは避ける必要があります。このことは、発現範囲の広いCD127（図10）とCD4で実証されています。CD127^lo CD4^hi細胞は、CD127^neg CD4^hiと区別がつかない。CD3^neg CD4^hiクラスターを持たないCD3のようなマーカーを用いると、Alexa700と組み合わせても集団を容易に識別できる。スピルオーバーと拡散の値を以下に示す（表 2）。

図10. スピルオーバーの考察。ヒト末梢血をCD4SBUV665（MCA1267SBUV665）、CD127（HCA145A647）、CD3A700（MCA463A700）で染色したものです。スピルオーバー(Spillover)・拡散(Spreading)は各表に示す。

表2. SBUV655のスピルオーバーと拡散(Spillover and Spreading)の値

Spillover:

Spreading:

SBUV740は、StarBright Dyesのすべての利点を備えた明るい355 nmレーザー励起色素で、従来のフローサイトメトリーとフルスペクトルフローサイトメトリーの両方での使用に適しています。SBUV740は従来のタンデムではなく、2倍の明るさを持ち（図11）、同様の発光最大を持つ色素に比べて640 nmレーザーからの発光が減少します。さらに、SBUV740はユニークなスペクトルプロファイルを持っているため、スペクトルフローサイトメトリーパネルに加えるのに最適です。

図11. 明るさの比較。ヒト末梢血をCD4SBUV740（MCA1267SBUV740）またはCD4 BUV737で染色した。SBUV740は比較色素の2倍の明るさである。BUV, Brilliant Ultraviolet; SBUV, StarBright UltraViolet; SI, stain index.

SBUV665 Dyeは、StarBright Dyesのすべての利点を備えた355nm レーザー励起の明るい色素で、従来のフローサイトメトリーおよびフルスペクトラムのフローサイトメトリーでの使用に適しています（図12）。

図12. 明るさの比較。　ヒト末梢血をCDSBUV795（MCA1267SBUV795）またはCD4 BUV805で染色した。SBUV795は競合色素に比べ明るい（2倍以上）。　（略語）BUV:Brilliant Ultraviolet、SBUV:StarBright UltraViolet、SI:stain index。

SBUV795 は、最も近い競合色素（図 13）の 2倍の輝度を持ち、スピルオーバープロファイルも類似しています。固定可能で、特別なバッファーを必要とせず、タンデム色素に見られないロット間の再現性があるため、SBUV795は既存のパネルに簡単に追加でき、レーザーやフィルターの使用を拡大したり、低輝度色素を置換して分解能を向上させたりすることが可能です。ヒトおよびマウスサンプルにおけるSBUV795と他の蛍光色素との染色例（他のStarBright色素とのマルチプレクスを含む）は、図12に示されています。

図13. SBUV795の性能。　ヒト末梢血を様々なSBUV795標識抗体で染色し、様々なStarBright UltraViolet、StarBright Violet、Alexa標識抗体で対比染色を行った。染色は1%BSAを含むPBSにFcブロックを加えて行った。