蛍光色素は、最大励起波長と最大発光波長が類似していても、明るさが異なる場合があります。低発現マーカーやレアイベントには明るい蛍光色素が、高発現マーカーには暗い蛍光色素が好まれます。パネルデザインにおいて、すべての色素の相対的な明るさを知ることは、パネルデザインを改善し、分析を容易にし、より大きく優れたパネルを構築することにつながります。
このページでは、実験に使用する蛍光色素を選択する際に便利なリファレンスガイドを提供します。バイオ・ラッドの新しいStarBright Dyesと、ZE5 Cell Analyzerでのフローサイトメトリーでよく使われる他の色素のStain Indexを計算し、実験に適した色素を選択するのにお役立ていただけます。
355 nm 紫外(UV:Ultraviolet)励起色素
図1. Stain Indexの比較。CD4（MCA1267）に結合した様々な355 nm励起StarBright UltraViolet、Brilliant Ultraviolet、および従来の色素で染色したヒト末梢血のStain Index。生成されたデータは3-4人のドナーの平均であり、抗体は使用前に滴定し、ZE5 Cell Analyzerで分析した。紫はStarBright UltraViolet Dyes、赤はBrilliant UltraViolet、黄色は非ポリマー色素。
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405 nm Violet 励起色素
図2. Stain Indexの比較。CD4（MCA1267）に結合した様々な405 nm励起StarBright Violet、Brilliant Violet、および従来の色素で染色したヒト末梢血のStain Index。生成されたデータは3-4人のドナーの平均値であり、抗体は使用前に滴定し、ZE5 Cell Analyzerで分析した。紫はStarBright Violet色素、赤はBrilliant Violet、緑はSuper Bright、黄色は非ポリマー色素。
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488 nm Blue 励起色素
図2. Stain Indexの比較。CD4（MCA1267）に結合した様々な405 nm励起StarBright Violet、Brilliant Violet、および従来の色素で染色したヒト末梢血のStain Index。生成されたデータは3-4人のドナーの平均値であり、抗体は使用前に滴定し、ZE5 Cell Analyzerで分析した。紫はStarBright Violet色素、赤はBrilliant Violet、緑はSuper Bright、黄色は非ポリマー色素。
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多くの要因がデータの見た目に影響を与える可能性があります。これは、フローサイトメーター、フィルター、蛍光体を励起するためのレーザー、レーザー出力、機器の設定、また選択したプロットの種類などが考えられます。このため、本データはあくまで目安としてご利用いただき、ご自身の装置でステインインデックスを算出されることをお勧めします。
蛍光物質とイムノフェノタイピングの詳細については、フローサイトメトリーリソース（英語）を参照してください。また、フローサイトメトリーや抗体の資料についてはこちらから見ることができます。